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如何利用激光顯微切割來改善生物標(biāo)記物工作流程

點(diǎn)擊次數(shù):818 更新時間:2022-06-24

癌癥研究:快速可再現(xiàn)的生物標(biāo)記物探索

生物標(biāo)記物可用作特定疾病如癌癥的指征標(biāo)記。這樣一來,腫瘤微環(huán)境就容易引起人們的警覺。但在腫瘤區(qū)域和非腫瘤區(qū)域以及腫瘤本身之間存在著明顯的分子差異。這些情況只能通過分離這些區(qū)域的特定的、微小的部分來破譯。                                                                                 
圖片4.png

 

 


所以,徠卡LMD系統(tǒng)允許直接將樣本收集到下游的分析容器如PCT微管當(dāng)中用于快速組織均質(zhì)化、蛋白質(zhì)提取和酶解。
壓力循環(huán)技術(shù)(PCT, PressureBioSciences Inc.)利用高壓為大規(guī)模分析加快樣本制備。PCT可在1小時內(nèi)完成對LMD樣本的處理,更大的活檢組織塊則可在3小時內(nèi)完成處理。
此聯(lián)用技術(shù)可以高精度、快速地分離腫瘤微環(huán)境。來自不同組織區(qū)域的下游分子分析將帶來重大意義,因?yàn)橄掠畏肿涌梢赃M(jìn)行單獨(dú)分析,而不用再作為混合物加以分析。
 
 




激光顯微切割利用激光在細(xì)胞層面切割顯微鏡下的樣品。切割后,徠卡LMD系統(tǒng)利用重力將解剖物收集到試樣下方的容器內(nèi)。
 
單細(xì)胞精度下的生物標(biāo)記物探索工作流程
徠卡激光顯微切割系統(tǒng)能夠精準(zhǔn)切割您感興趣的單個細(xì)胞,改進(jìn)您的工作流程。所以工作都在可視化控制之下,不會污染到周圍組織。


1. 樣本制備




 
激光顯微切割通常會用到專門的薄膜切片。LMD的樣本制備較為直觀,可以從組織學(xué)的經(jīng)典制備方法中獲得。
下游蛋白質(zhì)組學(xué)方面,我們推薦使用PET薄膜切片(幾乎不存在軟化劑)或DIRECTOR™切片以滿足*無薄膜消融。
石蠟包埋使組織樣品形成組織,可以切成薄片?;蛘呖梢岳美鋬銮衅瑏碇苽錁颖厩衅?。
我們將提供最合適您應(yīng)用的LMD切片。

 




 
2. 固定和染色




 
LMD應(yīng)用中可根據(jù)感興趣的結(jié)構(gòu)來對組織進(jìn)行固定和染色。此處包括了明場和熒光染色。
該步驟可通過染色設(shè)備實(shí)現(xiàn)自動化處理。
絕大多數(shù)染色劑一般都與下游蛋白組學(xué)相容。盡管如此,我們依然有必要做提前的調(diào)查。

 
3. 可視化和ROI




 
徠卡LMD系統(tǒng)可自動化生成樣品的全玻片圖像概覽,輕松導(dǎo)航至您的感興趣區(qū)域(ROI)。
ADM軟件模塊能夠識別出您的感興趣區(qū)域并自動標(biāo)記形狀,或者您可以手動勾勒出形狀。

 




小鼠大腦,甲酚紫。運(yùn)行ADM軟件模塊前后,自動識別和檢測神經(jīng)元。
4. 激光顯微解剖




 
接下來在目測控制下通過激光切出特定的ROI并直接通過重力作用進(jìn)行收集。
點(diǎn)擊鼠標(biāo)即可分離出癌癥材料或任何其他ROI并進(jìn)行必要的匯集,然后按需要收集到1個或多個不同的反應(yīng)容器內(nèi)。
您可以使用標(biāo)準(zhǔn)耗材如PCR試管,或者利用特定的LMD收集裝置將樣本直接收集到下游分析容器內(nèi)如PCT μTubes試管(Pressure BioSciences Inc.),詳見下一步操作。





 
5. 蛋白質(zhì)制備




 
小樣本的均質(zhì)化、提取和酶解消化可利用如Pressure BioSciences Inc.的壓力循環(huán)技術(shù)(PCT)來完成。遵循LMD-PCT工作流程可快速、可再現(xiàn)地制備生物肽且整個過程不超過1小時(Lee S et al., Cell Reports 2020,doi.org/10.1016/j.celrep.2020.03.066),能夠節(jié)省出數(shù)小時時間而且小組織樣本的制備*不用“動手"。

 




 
6. 分析
 通過質(zhì)譜法分析樣本并識別出生物標(biāo)記物。
典型研究領(lǐng)域

  • 生物標(biāo)記物探索

  • 癌癥研究

  • 個體化醫(yī)療

  • 轉(zhuǎn)譯研究

  • 蛋白質(zhì)組學(xué)

  • 代謝組學(xué)

相關(guān)產(chǎn)品




徠卡LMD6 & LMD7
激光顯微切割能夠讓用戶分離出特定的單一細(xì)胞或整個組織區(qū)域。

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